尽管HDR介导的基因编辑在FA细胞中取得一定的成功,但其基因编辑效率普遍较低,且需要特定的筛选策略。因此,研究者开始探索NHEJ路径在FA细胞中恢复FANC蛋白功能的可能性。van de Vrugt等[23]利用CRISPR-Cas9基因编辑技术,对FA患者的FANCF基因突变进行了深入研究。他们发现,通过CRISPR-Cas9诱导的DSB触发NHEJ修复路径,无需外部模板,便可有效修复FANCF基因突变,经编辑的细胞在MMC的处理下存活率提升了27%。此外,该团队还在小鼠胚胎干细胞(mouse embryonic stem cells, mESC)中进行了HDR修复途径,尽管其基因编辑效率较低(≤6%),但经过基因编辑的胚胎干细胞在增殖方面展现出了明显的优势。在Román-Rodríguez等[24]的研究中,通过CRISPR-Cas9技术激活NHEJ机制,成功修复了FA患者HSC中的FANCA、FANCC、FANCD1等关键基因突变:利用CRISPR-Cas9系统在靶基因上引入DSB,利用NHEJ修复路径产生补偿性插入/缺失突变,恢复了基因的阅读框,从而纠正了突变基因的功能缺陷,经过编辑的细胞在体外(实验室培养)和体内(小鼠模型移植)实验中均展现出显著的增殖优势。. This evidence concerns the gene FANCA and Friedreich ataxia.