BCL2 and B-cell chronic lymphocytic leukemia: CLL在伊布替尼耐药时凋亡蛋白变化以促凋亡蛋白表达下降为主:对3例患者伊布替尼耐药前后的CD19+ B淋巴细胞进行RNA-seq高通量测序。以log2 Fold Change绝对值>0.5且P<0.05作为筛选条件对表达谱数据进行差异分析,结果显示伊布替尼敏感组和耐药组间有3 628个差异表达基因(DEG),耐药组1 077个基因高表达、2 551个基因低表达。DEG与BCL2家族的韦恩分析显示二者交集的基因共9个,其中多数为促凋亡蛋白(图1A)。对BCL2家族基因的差异倍数排序,提示伊布替尼耐药时BCL2家族基因表达变化以促凋亡基因表达下降为主,其中BH3-only蛋白BIM mRNA下降最为明显(降低87.92%,P<0.0001)(图1B)。为进一步验证伊布替尼耐药时BIM表达变化,我们在MEC1细胞株中使用小剂量浓度梯度诱导法,构建MR。通过RNA-seq技术检测分析MEC1细胞及MR中BCL2家族的表达变化(图1C)。与原代细胞结果相一致,MR中存在多种促凋亡基因的表达降低,其中BIM mRNA表达下降(图1D)。伊布替尼处理后,相较于MEC1细胞,MR中BIM的蛋白表达量明显下降(图1E)。此外,随着细胞耐药水平逐步升高,BIM mRNA表达逐步降低(P<0.05,图1F),提示BIM在CLL伊布替尼耐药中可能发挥重要作用。