CRISPR/Cas9技术相比于ZFN和TALEN,有更高的基因位点选择性和准确性。将CAR载体定点插入基因组中可增加CAR表达的均一性,2017年Sadelain团队首次报道将CAR插入TRAC基因座中,可减少CAR信号通路的持续激活以延缓CAR-T细胞的分化和衰竭,增加CAR-T细胞的抗肿瘤活性[9]。同年,宾夕法尼亚大学Ren等[10]运用CRISPR/Cas9技术实现CAR-T细胞TCR和B2M双敲除,输注后未发生GVHD;在此基础上设计的TCR、B2M和PD1三敲除CAR-T细胞进一步显示出更显著的T细胞抗肿瘤活性。2019年耶鲁大学陈斯迪团队开发AAV-Cpf1 KIKO技术,建立了一个稳定的双CAR敲入和免疫检查点敲除系统,一步法制备CD22BBz和CD19BBz双敲入的同时破坏TRAC及PDCD1功能的工程改造T细胞,在体内外均表现出强效的细胞因子分泌功能和细胞毒性[11]。. This evidence concerns the gene B2M and graft versus host disease.