CD274 and non-small cell lung carcinoma: 将92例患者的NSCLC组织构建组织芯片,将组织芯片置于二甲苯中脱蜡,用分级酒精水化并进行抗原修复,室温下置于3%过氧化氢(HO)中10 min以灭活内源性过氧化物酶。用PBS洗涤3次后,在室温下用2%牛血清白蛋白(BSA,目录号B2064,西格玛,美国)封闭30 min后,分别滴加一抗CD105(1:500,目录号ab28364,Abcam,英国)、CD68(1:200,目录号ab34710,Abcam,英国)和PD-L1(1:200,目录号:329702,BioLegend,美国)在4 °C下孵育过夜。用PBS洗涤后,二抗(1:200,目录号ab6721,Abcam,英国或1:200,目录号ab205719,Abcam,英国)在37 °C下孵育60 min。然后用Dako REALTM EnVisionTM(DAB,目录号PW017,Sangon生物技术公司,中国)显色5 min,苏木精复染3 min,盐酸酒精分化,反蓝。自来水冲洗1 min后经梯度酒精脱水、透明、最后中性树胶封片。