MAPK3 and non-small cell lung carcinoma: 用免疫荧光、RT-PCR和Western blot方法检测TLR5在三种不同NSCLC细胞株中的表达。分别用0 μg/mL、0.01 μg/mL、0.1 μg/mL、1 μg/mL、5 μg/mL、10 μg/mL的鞭毛蛋白刺激,用NF-κB荧光素酶报告基因质粒瞬时转染后,检测细胞内NF-κB荧光素酶的活性。选择TLR5表达最高的SPC-A-1细胞株为实验对象,选择0.1 μg/mL的鞭毛蛋白,分别用0 μg/mL、0.01 μg/mL、0.1 μg/mL、1 μg/mL、10 μg/mL的TLR5抗体抑制通路活化,检测细胞内NF-κB荧光素酶的活性,验证TLR5活化通路。构建TLR5-shRNA,转染SPC-A-1细胞48 h后,以0.1 μg/mL浓度鞭毛蛋白分别刺激SPC-A-1细胞及转染的SPC-A-1细胞,在刺激0 min、10 min、30 min、60 min,用Western blot方法比较TLR5信号通路因子p-IKBα、p-ERK1/2、p-JNK、IKBα、ERK1/2的变化。