用Trizol RNA试剂盒提取H69、H69AR细胞株中总RNA,操作按照说明书进行;测量总RNA浓度,取1 μg RNA按逆转录合成试剂盒说明合成cDNA,然后以该cDNA为模板,PCR仪中扩增提取SCLC细胞中的RNA进行逆转录,采用SYBR Green染料法行实时荧光定量PCR。SPHK1及内参照GAPDH的引物序列见表 1。逆转录反应及PCR扩增参照试剂盒说明进行,以SPHK1基因的上下游引物进行PCR扩增,PCR反应在实时定量PCR反应仪上进行;反应条件:95 °C 30 s,(95 °C 5 s, 60 °C 30 s)*40 cycles,4 °C。反应结束后确认Real Time PCR的扩增曲线和融解曲线,进行PCR定量时制作标准曲线。基因的表达量F=2-∆∆Ct,三次独立实验后得到的数据运用公式RQ=2-∆∆Ct的方法进行分析。△△ct=(待测样品的目的基因的Ct的平均值-待测样本的看家基因的Ct的平均值)-(对照样品的目的基因的Ct的平均值-对照样本的看家基因的Ct的平均值)。. This evidence concerns the gene SPHK1 and small cell lung carcinoma.