VEGFD and non-small cell lung carcinoma: 组织切片免疫组织化学染色采用免疫酶标法,VEGF-C、VEGF-D、VEGFR-3蛋白免疫组织化染色阳性表达定位于肿瘤细胞及巨噬细胞的胞质,呈棕黄色颗粒,VEGFR-3还可见于细胞间质脉管内皮细胞。每例切片至少计数10个400倍视野,阳性细胞数 < 1%记为0分,1%-25%为1分,26%-50%为2分,51%-75%为3分。按染色强度计分,淡棕褐色记1分,棕褐色记2分,深棕褐色记3分。以两者相加所得总分进行判定,得分≤2分记为表达阴性, > 2分记为表达阳性;由不相同的5位技术人员分别计算1次每组的表达阳性率,各组5次计算结果的平均值即为该组的表达阳性率。评估肿瘤组织中淋巴管生成的重要指标是组织中的微淋巴管密度,podoplanin蛋白是一种表达于脉管系统内皮细胞内的特异蛋白,对识别淋巴管内皮细胞具有较高的特异性,在NSCLC组织中,podoplanin蛋白是合适的淋巴管标记物,免疫组织化学染色能使表达有podoplanin蛋白的微淋巴管内皮细胞着色[15, 16],再通过高倍镜下进行微淋巴管计数,五个不同视野的平均值作为微淋巴管密度。免疫磁珠负性富集法筛选出外周血循环肿瘤细胞,免疫荧光染色确定CTC,镜下观察CTC形态,计数各组CTC数量,比较各组差异。