Trizol试剂盒提取NSCLC组织、癌旁组织以及边缘肺组织中的总RNA,逆转录合成cDNA。根据Gene Bank中MTAP的mRNA序列,利用Primer Premier 5.0引物设计软件,设计引物序列,实时荧光定量PCR检测样本中MTAP cDNA水平,β-actin基因做内对照。引物:MTAP(292 bp):上游引物5'-CGCTTGGTTCCCTTAGTC-3',下游引物5'-GATGTTCGCCTGGTAGTT-3';β-actin(314 bp):上游引物5'-TCCTGTGGCATCCACGAAACT-3';下游引物5'-GAAGCATTTGCGGTGGACGAT-3'。反应在25 μL的体系中进行,其中2×QuantiTect SYBR Green PCR 12.5 μL、10 μM的上下游引物各1 μL、样本cDNA 2 μL(300 ng)、RNA酶灭活水8.5 μL。热循环如下:94 °C、5 min;94 °C、30 s,57 °C、30 s,72 °C、60 s,40个循环;72 °C、10 min。应用2-ΔΔCt法[2]分析目的基因和内参基因的Ct值,计算NSCLC组织和癌旁组织中MTAP mRNA相对于边缘肺组织的表达差异。. The gene discussed is ACTB; the disease is non-small cell lung carcinoma.