采用TA克隆法分别构建EGFR基因外显子19、外显子21野生型克隆和突变型(del746-750、L858R)克隆:分别提取已知EGFR外显子19突变类型为del746-750的NSCLC细胞系PC-9、EGFR外显子21突变类型为L858R的细胞系H1975以及EGFR外显子19、21均为野生型的细胞系A549的DNA为模板进行PCR,PCR产物采用凝胶回收试剂盒进行回收纯化,纯化产物与pGEM-T easy(Promega)载体连接,转化入大肠杆菌感受态细胞,37 °C过夜培养,筛选出重组体,将重组体加至LB培养基,37 °C摇床孵育过夜,提取质粒,测序,验证转入序列的正确性。序列正确的质粒-20 °C冰箱中保存待用。. Here, EGFR is linked to non-small cell lung carcinoma.